本實驗室經(jīng)過八年反復(fù)專研,獨創(chuàng)了一套獨特的技術(shù)應(yīng)用于5'RACE和3'RACE的擴(kuò)增。多年的RACE實驗經(jīng)驗,RACE作為本公司的核心技術(shù)項目之一,我們有信心能為您獲得幾乎任何一個cDNA的全長序列。
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技術(shù)簡介
RACE(rapid-amplification of cDNA ends),即cDNA末端快速克隆技術(shù),是一種基于PCR從低豐度的轉(zhuǎn)錄本中快速擴(kuò)增cDNA的5'和3’末端的有效方法。相比于其他獲得新基因的方法,RACE原理簡單、無需建立文庫、快速廉價,正受到越來越多科研工作者的重視。
3'末端RACE
利用mRNA的3'末端的poly(A)尾巴作為一個引物結(jié)合位點,以連有SMART寡核苷酸序列通用接頭引物的Oligo(dT)30MN作為鎖定引物反轉(zhuǎn)錄合成標(biāo)準(zhǔn)第一鏈cDNA。然后用一個基因特異引物作為上游引物,用一個含有部分接頭序列的通用引物作為下游引物,以cDNA第一鏈為模板,進(jìn)行PCR循環(huán),把目的基因3' 末端的DNA片段擴(kuò)增出來(圖1)。
5'末端RACE
利用一條基因特異性反轉(zhuǎn)錄引物,在反轉(zhuǎn)錄酶的作用下合成cDNA第一鏈,將RNA-DNA雜合鏈中的RNA降解純化后,利用末端轉(zhuǎn)移酶在cDNA鏈的3’端加入PolyC尾巴,然后利用錨定引物和一條基因特異性引物擴(kuò)增(圖2)。
服務(wù)內(nèi)容
技術(shù)流程
樣品與實驗結(jié)果
注:
1. 請保證材料或者總RNA新鮮,如果基因的含量較低或者未知序列較長,樣品量需相應(yīng)增加;
2. 我們會根據(jù)已知序列進(jìn)行特異性擴(kuò)增,如果得不到目的序列或為非目的基因的序列,我們將停止實驗并收取實驗成本費用;如果得到序列與您提供的序列有個別堿基不符,我們在征求您的意見后決定是否進(jìn)行RACE實驗;
3. 我們將設(shè)計跨內(nèi)含子引物PCR檢驗基因表達(dá)水平,如果經(jīng)驗證,樣品中基因表達(dá)含量低時,我們將與您溝通后,決定下一步實驗使用的方法;
4. 對于原核生物RNA 我們僅進(jìn)行5' RACE。
實驗結(jié)果圖片示例