1 基本說明

DH5α是一種常用于質(zhì)粒克隆的生物工程菌株，在使用pUC系列質(zhì)粒載體進行DNA轉(zhuǎn)化時， 由于載體DNA產(chǎn)生的LacZα多肽和DH5α編碼的lacZ△M15相結(jié)合，實現(xiàn)α-互補性，從而顯示β-半乳糖苷酶活性。利用這一特性，可以很容易利用藍白斑篩選鑒別重組體菌株。

本公司生產(chǎn)的DH5α感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌DH5α菌株經(jīng)特殊工藝處理得到的感受態(tài)細胞。本產(chǎn)品被用于DNA的化學轉(zhuǎn)化，經(jīng)pUC19質(zhì)粒檢測，轉(zhuǎn)化效率可達到10⁸cfu/ug。

2 基因型

F - φ80lacZΔM1 5 Δ(lacZYA-argF) U1 69 deoR recA1 endA1 hsdR1 7 (r k - , m k + ) phoA supE44 λ - thi-1 gyrA96 relA1

3 儲存及使用環(huán)境

本產(chǎn)品應保存在-70℃，不可反復凍融或放置時間過長，否則會降低轉(zhuǎn)化效率。

進行轉(zhuǎn)化過程中，請根據(jù)相應溫度及無菌條件的要求進行。

操作方法

請按照無菌條件標準進行以下操作：

1. 取感受態(tài)細胞置于冰浴中，如需分裝可將剛?cè)诨毎麘乙悍盅b到無菌預冷的離心管中置于冰浴中。
（一次轉(zhuǎn)化感受態(tài)細胞的建議用量為50μl可以根據(jù)實際情況分裝使用，應注意所用DNA體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。以下實驗以100μl感受態(tài)細胞為例。）

2. 向感受態(tài)細胞懸液中加入目的DNA，100μl的感受態(tài)細胞能夠被1ng超螺旋質(zhì)粒DNA（或者10μl以下的連接產(chǎn)物）所飽和，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物在冰浴中靜置30分鐘。

3. 將離心管置于42℃水浴中放置60-90秒，然后快速將管轉(zhuǎn)移到冰浴中使細胞冷卻2-3分鐘該過程不要搖動離心管。

4. 向每個離心管中加入500μl無菌的LB培養(yǎng)基或者SOC培養(yǎng)基，混勻后置37℃搖床，150rpm振蕩培養(yǎng)45分鐘，目的是使菌體復蘇，并使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標記基因表達。

5. 復蘇的菌體混勻后，吸取100ul均勻涂布于含相應抗生素的LB固體平板上，37℃倒置培養(yǎng)12-16小時。
（涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整。如轉(zhuǎn)化的DNA總量較多，可取更少量轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。反之，如轉(zhuǎn)化的DNA總量較少，可取200-300μl轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂布平板。如果預計的克隆較少可通過離心4000rpm 2分鐘后吸除部分培養(yǎng)液，重新懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可置于4℃保存如果次日的轉(zhuǎn)化菌落數(shù)過少可以將剩下的菌液再涂布新的培養(yǎng)板。）

注意事項與售后服務

1. 請保證感受態(tài)細胞正確儲存在-70℃低溫環(huán)境。

2. 請保證轉(zhuǎn)化操作的無菌環(huán)境。

3. 如果問題產(chǎn)生是由于感受態(tài)本身質(zhì)量造成的，我們將免費上門替換。

如果您在感受態(tài)使用過程中發(fā)現(xiàn)任何問題，或者需要一些突發(fā)狀況的的解決方案，您可以隨時聯(lián)系我們！