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基本信息
載體類型: | 大腸桿菌蛋白表達載體; pCold系列質(zhì)粒 |
載體抗性: | Amp |
載體標簽: | N‐His, N‐Factor Xa |
篩選標記: | / |
啟動子: | cspA |
表達水平: | 高 |
載體大小: | 4407bp |
克隆方法: | 多克隆位點,限制性內(nèi)切酶 |
5' 測序引物: | pCold-F: 5'-ACGCCATATCGCCGAAAGG-3' |
3' 測序引物: | pCold-R: 5'-GGCAGGGATCTTAGATTCTG-3' |
備注: | 如有侵權請產(chǎn)權持有人盡快聯(lián)系法務15927229196 |
質(zhì)粒圖譜和多克隆位點信息
注意:
客戶在我公司選擇構建載體服務項目時,請自行提供母源載體。
如要使用本公司保存的母源載體時,本公司不能保證所有母源載體完全符合客戶預期,也不承擔由此產(chǎn)生的任何責任。
載體描述
闡明蛋白質(zhì)的結構和功能是后基因組研究的一個重要課題。高效率的蛋白質(zhì)表達系統(tǒng)是研究這些課題的不可缺少的基本技術。大腸桿菌作為宿主的表達系統(tǒng)中被廣泛使用于生產(chǎn)重組蛋白。大腸桿菌表達系統(tǒng)具有良好的優(yōu)勢,方法簡單,成本低。然而,對于某些基因,蛋白表達很困難,表達的蛋白質(zhì)不溶。
為了解決這些問題,TAKARA與Masayori Inouye教授(美國新澤西醫(yī)學和牙科大學)進行聯(lián)合研究,以制定一個高效基于低溫冷休克蛋白基因的大腸桿菌表達載體。pCold DNA系列產(chǎn)品具有上述的優(yōu)點,并提供了一個重要功能和結構的分析以及其他蛋白質(zhì)研究領域的工具。
<產(chǎn)品概況和特點>
當培養(yǎng)的大腸桿菌的溫度充分降低,幾乎暫時停止生長大部分的蛋白表達減少,而此時一組蛋白質(zhì)稱為“冷休克蛋白”被專門誘導表達。
冷休克表達載體,pCold I-IV, 是利用冷休克基因cspA啟動子設計高效率蛋白質(zhì)表達載體。cspA的啟動子的下游處,插入了lac操縱子,以便嚴格控制表達。此外,5'非翻譯區(qū)(5'UTR),翻譯增強元件(TEE),His標簽序列,Xa因子切割位點和多克隆位點(MCS)位于在cspA啟動子的下游的。由于該產(chǎn)品采用了大腸桿菌的啟動子,大多數(shù)大腸桿菌菌株可被用作表達宿主。有四種類型的pCold載體,他們的原件的位置稍有不同,TEE,His標簽序列和Factor Xa酶切位點。
載體序列
ORIGIN
1 aaggaatggt gtggccgatt aatcataaat atgaaaaata attgttgcat cacccgccaa
61 tgcgtggctt aatgcacatc aaattgtgag cggataacaa tttgatgtgc tagcgcatat
121 ccagtgtagt aaggcaagtc ccttcaagag ttatcgttga tacccctcgt agtgcacatt
181 cctttaacgc ttcaaaatct gtaaagcacg ccatatcgcc gaaaggcaca cttaattatt
241 aagaggtaat acaccatgaa tcacaaagtg catcatcatc atcatcatat cgaaggtagg
301 catatggagc tcggtaccct cgagggatcc gaattcaagc ttgtcgacct gcagtctaga
361 taggtaatct ctgcttaaaa gcacagaatc taagatccct gccatttggc ggggattttt
421 ttatttgttt tcaggaaata aataatcgat cgcgtaataa aatctattat tatttttgtg
481 aagaataaat ttgggtgcaa tgagaatgcg caggcccttt cgtctcgcgc gtttcggtga
541 tgacggtgaa aacctctgac acatgcagct cccggagacg gtcacagctt gtctgtaagc
601 ggatgccggg agcagacaag cccgtcaggg cgcgtcagcg ggtgttggcg ggtgtcgggg
661 ctggcttaac tatgcggcat cagagcagat tgtactgaga gtgcaccata aaattgtaaa
721 cgttaatatt ttgttaaaat tcgcgttaaa tttttgttaa atcagctcat tttttaacca
781 ataggccgaa atcggcaaaa tcccttataa atcaaaagaa tagcccgaga tagggttgag
841 tgttgttcca gtttggaaca agagtccact attaaagaac gtggactcca acgtcaaagg
901 gcgaaaaacc gtctatcagg gcgatggccc actacgtgaa ccatcaccca aatcaagttt
961 tttggggtcg aggtgccgta aagcactaaa tcggaaccct aaagggagcc cccgatttag
1021 agcttgacgg ggaaagccgg cgaacgtggc gagaaaggaa gggaagaaag cgaaaggagc
1081 gggcgctagg gcgctggcaa gtgtagcggt cacgctgcgc gtaaccacca cacccgccgc
1141 gcttaatgcg ccgctacagg gcgcgtacta tggttgcttt gacgtatgcg gtgtgaaata
1201 ccgcacagat gcgtaaggag aaaataccgc atcaggcgtc aggtggcact tttcggggaa
1261 atgtgcgcgg aacccctatt tgtttatttt tctaaataca ttcaaatatg tatccgctca
1321 tgagacaata accctgataa atgcttcaat aatattgaaa aaggaagagt atgagtattc
1381 aacatttccg tgtcgccctt attccctttt ttgcggcatt ttgccttcct gtttttgctc
1441 acccagaaac gctggtgaaa gtaaaagatg ctgaagatca gttgggtgca cgagtgggtt
1501 acatcgaact ggatctcaac agcggtaaga tccttgagag ttttcgcccc gaagaacgtt
1561 ttccaatgat gagcactttt aaagttctgc tatgtggcgc ggtattatcc cgtattgacg
1621 ccgggcaaga gcaactcggt cgccgcatac actattctca gaatgacttg gttgagtact
1681 caccagtcac agaaaagcat cttacggatg gcatgacagt aagagaatta tgcagtgctg
1741 ccataaccat gagtgataac actgcggcca acttacttct gacaacgatc ggaggaccga
1801 aggagctaac cgcttttttg cacaacatgg gggatcatgt aactcgcctt gatcgttggg
1861 aaccggagct gaatgaagcc ataccaaacg acgagcgtga caccacgatg cctgtagcaa
1921 tggcaacaac gttgcgcaaa ctattaactg gcgaactact tactctagct tcccggcaac
1981 aattaataga ctggatggag gcggataaag ttgcaggacc acttctgcgc tcggcccttc
2041 cggctggctg gtttattgct gataaatctg gagccggtga gcgtgggtct cgcggtatca
2101 ttgcagcact ggggccagat ggtaagccct cccgtatcgt agttatctac acgacgggga
2161 gtcaggcaac tatggatgaa cgaaatagac agatcgctga gataggtgcc tcactgatta
2221 agcattggta actgtcagac caagtttact catatatact ttagattgat ttaaaacttc
2281 atttttaatt taaaaggatc taggtgaaga tcctttttga taatctcatg accaaaatcc
2341 cttaacgtga gttttcgttc cactgagcgt cagaccccgt agaaaagatc aaaggatctt
2401 cttgagatcc tttttttctg cgcgtaatct gctgcttgca aacaaaaaaa ccaccgctac
2461 cagcggtggt ttgtttgccg gatcaagagc taccaactct ttttccgaag gtaactggct
2521 tcagcagagc gcagatacca aatactgttc ttctagtgta gccgtagtta ggccaccact
2581 tcaagaactc tgtagcaccg cctacatacc tcgctctgct aatcctgtta ccagtggctg
2641 ctgccagtgg cgataagtcg tgtcttaccg ggttggactc aagacgatag ttaccggata
2701 aggcgcagcg gtcgggctga acggggggtt cgtgcacaca gcccagcttg gagcgaacga
2761 cctacaccga actgagatac ctacagcgtg agctatgaga aagcgccacg cttcccgaag
2821 ggagaaaggc ggacaggtat ccggtaagcg gcagggtcgg aacaggagag cgcacgaggg
2881 agcttccagg gggaaacgcc tggtatcttt atagtcctgt cgggtttcgc cacctctgac
2941 ttgagcgtcg atttttgtga tgctcgtcag gggggcggag cctatggaaa aacgccagca
3001 acgcggcctt tttacggttc ctggcctttt gctggccttt tgctcacata gtcatgcccc
3061 gcgcccaccg gaaggagctg actgggttga aggctctcaa gggcatcggt cgagatcccg
3121 gtgcctaatg agtgagctaa cttacattaa ttgcgttgcg ctcactgccc gctttccagt
3181 cgggaaacct gtcgtgccag ctgcattaat gaatcggcca acgcgcgggg agaggcggtt
3241 tgcgtattgg gcgccagggt ggtttttctt ttcaccagtg agacgggcaa cagctgattg
3301 cccttcaccg cctggccctg agagagttgc agcaagcggt ccacgctggt ttgccccagc
3361 aggcgaaaat cctgtttgat ggtggttaac ggcgggatat aacatgagct gtcttcggta
3421 tcgtcgtatc ccactaccga gatatccgca ccaacgcgca gcccggactc ggtaatggcg
3481 cgcattgcgc ccagcgccat ctgatcgttg gcaaccagca tcgcagtggg aacgatgccc
3541 tcattcagca tttgcatggt ttgttgaaaa ccggacatgg cactccagtc gccttcccgt
3601 tccgctatcg gctgaatttg attgcgagtg agatatttat gccagccagc cagacgcaga
3661 cgcgccgaga cagaacttaa tgggcccgct aacagcgcga tttgctggtg acccaatgcg
3721 accagatgct ccacgcccag tcgcgtaccg tcttcatggg agaaaataat actgttgatg
3781 ggtgtctggt cagagacatc aagaaataac gccggaacat tagtgcaggc agcttccaca
3841 gcaatggcat cctggtcatc cagcggatag ttaatgatca gcccactgac gcgttgcgcg
3901 agaagattgt gcaccgccgc tttacaggct tcgacgccgc ttcgttctac catcgacacc
3961 accacgctgg cacccagttg atcggcgcga gatttaatcg ccgcgacaat ttgcgacggc
4021 gcgtgcaggg ccagactgga ggtggcaacg ccaatcagca acgactgttt gcccgccagt
4081 tgttgtgcca cgcggttggg aatgtaattc agctccgcca tcgccgcttc cactttttcc
4141 cgcgttttcg cagaaacgtg gctggcctgg ttcaccacgc gggaaacggt ctgataagag
4201 acaccggcat actctgcgac atcgtataac gttactggtt tcacattcac caccctgaat
4261 tgactctctt ccgggcgcta tcatgccata ccgcgaaagg ttttgcgcca ttcgatggtg
4321 tccgggatct cgacgctctc ccttatgcga ctcctgcatt aggaagcagc ccagtagtag
4381 gttgaggccg ttgagcaccg ccgccgc
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